Søjlekromatografi

Vi har i min gruppe udført en søjlekromatografi for at adskille nogle aminosyrer fra en valle fra mælk.

Fremgangsmåde:

Vi bruger søjlekromatografi for at få adskilt de polæere aminosyrer fra vores valle, sådan så vi kun har leucin, isoleucin og valin. Vi starter med at tage 1,5 ml af vallen fra sødmælken og skummetmælken og tilsætter 8 ml af en blanding af heptan og acetone (75:25). Derefter tager vi 2 små reagensglas og mærker "1 og "2". Disse bruger vi til at opsamle aminosyrerne i. Derefter skal vi opsætte vores søjle som laves af en pasteurpipette. Denne sætter vi op i et stativ. I bunden anbringer vi en tot glasuld, som er fugtet af heptan. Denne skal fungere som en lille løs prop. Herefter fyldes søjlen næesten op med heptan, og der hældes sand op i pipetten oven på glasulden, ca. et lag på 3 mm. Derefter hælder vi et lag kieselgel henover, på omkring 3-6 cm. Til sidst hælder vi et lag sand på 3 mm i pipetten. Derefter lader vi noget af væesken løbe ud ned i et bægerglas. Herefter hælder vi vores valle ned i søjlen, hvor der tappes væske til overfladen af sandet. Derefter fylder vi søjlen helt op med heptan, hvor efter vi tapper væsken ned i reagensglas nummer 1. Derefter hælder vi propanon ned i søjlen, hvor efter vores aminosyrer vil falde ned gennem søjlen og ned i reagensglas 2.

Vi er i tvivl om :

1. Hvorfor fylder vi søjlen med heptan og acetone?

2. Hvorfor skal der sand og glasuld i søjlen?