gensplejsning

Det er muligt at gå dybt ned i det, da det jo er et helt operon (= samling af gener styret af en promotor, findes primært kun i prokaryoter), at genet for GFP-proteinet reguleres på (og glukose indvirker f.eks. også på reguleringen men bruges ikke i pGLO-forsøget). Jeg ville gå på denne hjemmeside og kigge på pGLO-plasmidet:

https://www.bio-rad.com/en-dk/applications-technologies/pglo-plasmid-map-resources?ID=NISQOC15https://www.bio-rad.com/en-dk/applications-technologies/pglo-plasmid-map-resources?ID=NISQOC15

pGLO-plasmidet er naturligvis rekombinant DNA, hvor araBAD-genet (som koder for et enzym, dog vha. flere gener, der kataboliserer arabinose) er udskiftet med GFP.

Basically, så fungerer araC-proteiner (som er transkriptionsfaktorer for operonet, kodet af araC-genet) normalt som repressorer på operonet, dvs. de forhindrer transkriptionen af genet, som jo er ligegyldigt og er spild af ressourcer at have aktiveret, når der ikke er arabinose tilstede (da genet bruges til at høste energi fra arabinose for at bakterien kan overleve, når der ikke er glukose men arabinose tilstede). Arabinose kan så bindes til araC-proteinerne og inducere dem, så de går fra være repressorer til at være aktivatorer. De kan så, i stedet for at sidde og repressere genet, flytte sig og sætte sig tæt ved pBAD-promoterregionet, der også gør det muligt for et RNA-polymerase at sætte sig på det -- dermed kan og vil GFP-genet transkriberes, og GFP kan blive translateret (proteinsyntese).

Som du kan se på pGLO-plasmidet, peger araC-genet, og pBAD og GFP-genet i to forskellige retninger (retningen for transkription), og det skyldes, at pBAD og GFP tilsammen udgør operonet (en samlet enhed). araC-genet er ikke en del af det men producerer bare det centrale regulerende stof for reguleringen af dette operon.

I bund og grund kan du bare sige, at arabinose binder sig til araC-proteinerne, som bliver til en aktivator, der aktiverer transkriptionen for GFP. Hvis der ikke er arabinose, hæmmer araC-proteinerne transkriptionen GFP-genet, da de så fungerer som repressorer.

Hvis du gerne vil se, hvordan araC både kan fungere både som en aktivator og repressor (og gå lidt i dybden med det) anbefaler jeg denne video ret korte video:

https://www.youtube.com/watch?v=ESw_dQBNTVI&ab_channel=SamMcMillan