Biologi
Opkoncentrering af plasmid-DNA
Hej Derude.
Jeg skal forklare med egne ord hvordan opkoncentrering af plasnmid-DNA sker.
Jeg er ikke sikker på hvad opkoncentreringen er og har ledt lidt efter det på netten.
- Er det at få gensplejset bakterier til at vokse på en agarplade med fx ampicillin, og så dør bakterier som ikke har fået indsplejset det ønskede plasmid med resistans overfor ampicillin.
Tak!
Svar #1
13. maj 2011 af exutu (Slettet)
Opformering af plasmidet sker gennem en baktiere. Opformeringen kaldes populært kloning da der bliver lavet eksakte kopier at bakteriens genom samt plasmidet. I gamle dage bruge man plasmider som havde 2 ressistens gener; Et man klippede i (tit tetracycline) og et man lod plasmidet beholde, tit ampicillin. Det gør man fordi der er 3 mulige udfald under sådanne forsøg:
1. Plasmidet overføres ikke til vektor (bakterie) denne vil ikke have resistens.
2. Plasmidet lukker sig sammen og insertet (det DNA fragment man vil indsætte i vektoren) kommer ikke ind i plasmidet og beholder derved både tetracycline og ampicillin ressistens.
3. plasmidet får insertet og beholder derved ampicillin ressistens men mister tetracycline resistens.
Man placerer bakterierne på ampicillin agar. 1 vil dø 2 og 3 vil overleve.Nu har man dog det problem at største delen af ens bakterier har vektoren uden insert (altså 2). Så man tager et aftryk af ampicillin plade og sætter på en tetracycline plade. Her vil alle de bakterier man er interesseret i dø da de har mistet tetracycline resistens. Man sammenligner så de 2 plader, og finder dem der mangler på pladen med tetracyclin. Disse er dem man er interesseret i.
De opformeres så i kultur tilsat rigeligt med næringsstoffer.
Dette er dog for længst en forældet metode da den er forholdsvis besværlig. Det er dog en god metode at forstå da den er ret grundlæggende for genteknologien.
Svar #2
13. maj 2011 af -Linda- (Slettet)
Wup man kan også transformere? Det bruges meget..
Her har man en vektor med det DNA som man ønsker at opformere. Vektoren indeholder fx ampicillin resistens.
Man kan dernæst tage nogle bakterier, få disse til at optage vektoren, man lader dem vokse lidt med medie (en time eller to), plater dem ud på agar plader med ampicillin.
Bakterierne vil gro og dele sig på pladen natten over ved 37 grader - forudsat, at de har optaget vektoren og derfor er resistente for ampicillinen.
Næste dag har man altså en række af små bakteriekolonier på en plader - dem man man tage nogle af, putte i et rør med medie og ampicillin og igen lade stå natten over v. 37 grader.. Her står de så og vokser, og man får et hav af bakterier og dermed et hav af plasmider med det ønskede DNA.
OK?
Svar #3
14. maj 2011 af kinke123 (Slettet)
Mange tak for svarene!
Det vil altså sige at opformering er det samme som opkoncentrering?
Perfekt!
Svar #4
14. maj 2011 af -Linda- (Slettet)
I princippet nej, opkoncentrering er ikke opformering... Men jeg har aldrig hørt om opkoncentrering af plasmider?
Skriv et svar til: Opkoncentrering af plasmid-DNA
Du skal være logget ind, for at skrive et svar til dette spørgsmål. Klik her for at logge ind.
Har du ikke en bruger på Studieportalen.dk?
Klik her for at oprette en bruger.