mutationer og DNA-profilanalyse

Du tænker i forbindelse med diagnosticering af genetiske sygdomme, ikke?

I så fald kender man for mange genetiske sygdomme netop den mutation, som resulterer i sygdommen. For fx seglcelleanæmi, som er en genetisk sygdom, der giver et muteret β-globin-protein (som er en af de to proteiner i de røde blodlegemer), indeholder et raskt gen sekvensen CCTGAGGAG, mens det syge gen har sekvensen CCTGTGGAG. Altså er et A blevet erstattet af T. Denne mutation spores vha. restriktionsenzymet MstII, som skærer i den førstnævnte (raske) sekvens, mens det ikke kan skære i den syge sekvens.

Tager du derfor en DNA-prøve fra en syg og en rask person, amplificerer prøverne vha PCR, skærer med MstII, og kører en gelelektroforese, ses et bånd mindre hos den syge person, netop fordi der kan skæres et sted mindre i den syge persons DNA.

Helt konkret vil den raske person vise båndstørrelser på 1,2 kilobasepar og 0,2 kilobasepar, mens den syge vil vise bånd ved 1,4 kilobasepar. Du vil selvfølgelig også se andre bånd end disse, men MstII klipper generelt ikke særlig mange steder i hele genomet, og derfor vil disse andre bånd være langt større end de ovennævnte.

Se opg. 2 i nedenstående link, der kan du se en lille grafik som forklarer:

http://img534.imageshack.us/img534/3301/dsc3951k.jpg

xD almen mol. bio eksamen ;)

Haha, lige præcis! Den korrekte besvarelse er vel noget med PCR og gelelektroforese, ikke? :P

Jo noget i den stil...Venter med spændning på resultatet fra den her ;)...og frygter organisk

Tak for hjælpen! Så man skal altså kende til mutationen, og til det raske gens sekvens, for at man kan lave det? Og skal man så udvælge et restriktionsenzym som man kan bruge i den pågældende analyse?

Men er det bare sådan: Man ved altså: Når den ikke klipper, er der en mutation (baseændring)?? 

Ja da genkendelses sekvensen for det pågældende restrictions enzym ændres så enzymet ikke kan klippe. Det gælder dog ikke generelt men kun for dette eksempel. Der er dog andre lignende og forsøget kan passes ind for det pågældende gen.

Hvordan finder man ud af hvilket restriktions enzym man skal bruge?

Ved at kende sekvensen af genet og sekvensen som restriktionsenzymet klipper

okay :) mange tak for hjælpen ! :)

Så altså man ved altså hvordan det "normale gen" ser ud og hvordan det vil klippes af restriktionsenzymerne, og så kan man se at det er anderledes, når der er en mutation? Skal lige havde det helt på det rene :b

Ja hvis vi har et hypotetisk gen som så sådanne ud:

5' ACTACGGGCCTGGTTAGGCAA
3' TGATCGCCGGACCAATCCGTT

og mutationen ser sådanne ud: (understreget)

5' ACTACGGGCATGGTTAGGCAA
3' TGATCGCCGTACCAATCCGTT

Vi ved så at EcoRII skærer præcis:

5' NNCCWGGNN
3' NNGGWCCNN

(W=A el. T, N= tilfældig base)

Som passer med det ikke muterede gen men ikke med det muterede gen. Så kan vi skærer med dette og se at vi vil få forskellige fragmenter anpå om man har sygdommen eller ej.