Biologi
PCR!!!!
Hej folkens.
Er der nogle som gider hjælpe mig med at besvare disse spørgsmål? har virkelig svært ved det :S
1. Hvilke egenskaber skal primerne vi benytter have og hvorfor benytter man 2 forskellige primere samtidigt?
2.Kan I begrunde hvorfor primerne er nødt til at have en længde på 18-26 baser – ville 3 baser ikke være nok?
3. Hvis vi går ud fra, at vi kun starter med en DNA-streng og at dette DNA fordobles ved hver cyklus, hvor mange kopier af vores intron har vi så efter 40 cykler?
4.Efter PCR overføres DNA-stykkerne til en gel og der sættes strøm til! Hvorfor sætter man strøm til?
Svar #1
04. marts 2010 af Graskian (Slettet)
3. 2^39 :)
4. man sætter strøm til for at lave en positiv/negativ pol som kan tiltrække DNA-stykkerne (Nukleotiderne i DNA har nogle elektrisk ladede grupper).
Svar #2
04. marts 2010 af -Linda- (Slettet)
1) primerne skal være komplementære til DNA-sekvenser på hver sin side af det stykke af DNAet som du ønsker at amplificere. Endvidere skal du lægge mærke til retningen af primer-sekvensen.
Et (urealistisk) eksempel, din sekvens er:
5'-AAAATTAAAACGCGCGCGCGCGCGTTTTGGTTTT-3'
Du er interesseret i at få stykket CGCGCGCGCGCGCG ampificeret via pcr, altså skal du bruge en primer som ligger lige før, og lige efter.. Læg endvidere mærke til retningerne, da du nødig vil, at der transkriberes i den forkerte retning...
Primer 1: 3´-TTTTAATTTT-5'
Primer 2: 3'-AAAACCAAAA-5'
Endvidere skal primerne ca. være 18 nukleotider lange (hvis den fx kun er 4 lange, er sandsynligheden jo ret høj for, at netop den sekvens er mange steder i dit DNA og så bliver det noget rod. Rent statisk kan du beregne at der er 25% sandsynlighed for at det er den base du ønsker pr. nukleotid, dvs. hvis primeren var 4 nukleotider lang, var sandsynligheden for at den fandtes et tilfældigt sted 0,25*0,25*0,25*0,25. Er primeren istedet 18 nukleotider er sandsynligheden 0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25*0,25... og altså noget mindre)
Sekvensen må ikke være komplementer sådan at den kan klistre til sig selv (fx AAAAGGTTTT - så kan Aerne og Terne jo klistre sammen.. ik smart)
du benytter to primere samtidig sådan at du får det specifikke område du er interesseret i, og ikke hele det lange DNAstykke
Svar #4
29. marts 2011 af maomml (Slettet)
#1
3. 2^39 :)
4. man sætter strøm til for at lave en positiv/negativ pol som kan tiltrække DNA-stykkerne (Nukleotiderne i DNA har nogle elektrisk ladede grupper).
nej, det er en gel elektroforese du har beskrevet.. PCR er den metode du replikere og klipper DNA stykkerne inden gel elektroforesen.
Svar #5
23. april 2011 af esmaralda1 (Slettet)
spørgsmål til -Linda- Svar #2
Er du sikker på at grunden til at de to primere benyttes samtidig er:
for at få et specifikt område som man er interesseret i, og ikke hele DNA strengen?
Altså hvis man ser bort fra dit eksempel og mere generelt.
Skriv et svar til: PCR!!!!
Du skal være logget ind, for at skrive et svar til dette spørgsmål. Klik her for at logge ind.
Har du ikke en bruger på Studieportalen.dk?
Klik her for at oprette en bruger.