Michealis-Menten-kurven

Data for Km er ikke nødvendig for at skitsere kurven.

v(0) plottes mod substratkoncentrationen. Dette giver en hyperbolisk funktion, hvor Halveffektspunktet svarer til Km. Du finder halveffekten ved at tage halv af maksimumeffekt på y-aksen (hastighed) og finde  den tilsvarende værdi på x-aksen (substrat).

Michaelis menten kurven følger følgende kurve:

v=e_o*k_cat*[S]/([S]+K_m)

e_o*k_cat=V_max

v=V_max*[S]/([S]+K_m)

når s→∞

v→V_max*[S]/[S]=V_max

Ved halveffektpunktet: v=0,5V_max

0,5V_max=V_max*[S]/([S]+K_m)

0,5=[S]/([S]+Km)

0,5[S]+0,5[Km]=[S]

0,5[Km]=0,5[S]

[S]=K_m

Altså jeg har følgende data:

Substratkonc. [S] (mM):

0
20
100
200
500
1200

Initialhastighed v (mM/min):

0
0,5
1,6
2,2
2,6
2,9

og jeg ved at Km = 100 mM

Jeg skal nu skitsere Michealis-Menten-kurven, og bestemme Vmax. Jeg er ikke helt sikker på hvordan jeg skal gøre det. 

Km er rigtig nok tæt på 100: 94 ±5,9

Jeg ville vælge at plotte data ind i et databehandlingsprogram med en god nonlinear regressionsfunktion. (fx graph, sigmaplot, kyplot etc.)

En anden mulighed er at lave en linear transformation af dine data.

Du har flere forskellige muligheder: Hanes plot, Eadie-Hofstee eller et Lineweaver-Burke plot. Hanes. Hanes plot giver normalt konstanter (kcat og Km) som er tættere på det rigtige end de 2 andre. Eadie Hofstee er normalt næstbedst og Lineweaver-Burke falder på en fin sidsteplads.

For at lave et Hanes plot skal du plotte s/v på y aksen og s på x-aksen. Så skal du lave en linear regression på dine data. Din regression vil imitere: [S]*1/Vmax+Km/Vmax=s/v.
Hældningen af din regression vil så være 1/vmax. Skæringen med y-aksen vil være Km/Vmax, og skæring med y-aksen vil være -Km. (Du kan selv tjekke ligningen efter).

Alternativt kan du plotte v mod v/s (Eadie Hofstee) eller 1/v mod 1/s (Lineweaver Burke).

Jeg vil dog foreslå at bruge et Hanes plot.

Desuden skal du fjerne 0,0 punktet hvis du laver en linear transformation (ikke nødvendig for nonlinear regression)