Biologi
Hvordan får man donor-DNA ind i jordbakterien?
Jeg sidder lige nu med en opgave om plantesygdomme, og er i gang med at besvare et punkt om hvorledes man kan gensplejse planter.
Fra jordbakterien, der som regel bruges til gensplejsningen, indsættes Ti-plasmidet med den ønskede del af donor-DNA indsat. Dette plasmid kan vha. bakterien derefter indsættes i plantecellen, og så kører den ellers derfra.
Men mit spørgsmål er så, hvordan danner man dette modificerede plasmid, som først skal indsættes i bakterien?
Edit: jeg kender proceduren frem til plasmidet, hvor DNA isoleres og opklippes, og sættes sammen med enzymer. Hvad man gør efter plasmidet har optaget donor-DNA springer min bog lidt for nemt igennem. Hvordan isoleres plasmider iøvrigt? Man kan vel ikke udsætte bakterien direkte for restriktionsenzymer, eller hvad? Det sjove er at bogen bagefter går ud fra at plasmiderne er taget ud af bakterierne, og når de nu skal ind blandes de med noget Ca++ osv., men den glemmer helt at få plasmiderne ud først.
En step-by-step ville være herlig, hvis nogen kunne give sådan en?
Svar #1
19. februar 2010 af YodawgYowwwwwww (Slettet)
Jeg kan desværre ikke huske det helt, og jeg er lidt usikker på hvad det er du helt præcis vil have svar på.
Plasmiderne plejer man at kunne købe, den genmodificerede plasmider... De har f.eks. donor-DNA'et, men så har de f.eks. også resistens overfor et antibiotikum. Så tager man en bakterie og bruger en væske, mener det er CaCl2, som hjælper bakterien med at optage plasmidet, altså den 'åbner' cellevæggen.. man udsætter også bakterien for et 'heat chock' som åbner cellen så plasmidet kan optages.. Processen hedder transformation.
Så har en bakterie altså optaget plasmidet. Så putter man den på en agarplade og tilsætter et næringsmedie, typisk LB og noget ampicillin. Ampicillinen gør at kun den bakterie som har optaget plasmidet vil replikere sig selv.. Til sidst ender du altså ud med mange bakterier som har plasmidet i sig.. da alle andre bakterier vil være døde..
Hent opgaverne om transformation af E. coli bakterier herinde på siden. De forklarer proceduren...
Jeg sidder og tænker over dit spørgsmål omkring hvordan man kan isolere plasmidet selv.. Når man har lavet alle de bakterier som jeg nævnte tidligere, så tilsætter man en emulgator som nedbryder bakteriens væg, og man nedbryder også membranen. Så bliver hele bakteriens 'indhold' ledt ud i væsken, og i dette tilfælde alle bakteriernes indhold. Så kan man isolere så man kun har plasmider ved at udnytte noget med plasmidernes ladning m.m. kunne jeg forestille mig... det er noget i den stil, men kan altså ikke give dig det præcise svar. Vil anbefale dig at læse opgaverne herinde på Portalen omkring det. Du kan evt starte med at søge på 'transformation'.. Håber det hjælper.
Skriv et svar til: Hvordan får man donor-DNA ind i jordbakterien?
Du skal være logget ind, for at skrive et svar til dette spørgsmål. Klik her for at logge ind.
Har du ikke en bruger på Studieportalen.dk?
Klik her for at oprette en bruger.