Omregning af absorbans for at bestemme Km?

Lambert Beers lov: A = ε*l*c, men det kræver, at du får oplyst ε og medmindre din opgave giver dig den oplysning, tror jeg ikke, det er denne du skal benytte.

Men er det nødvendigt? For K_M svarer også til den substratkoncentration, som du har ved ½ V_max

Den måde jeg bestemmer Km og Vmax på er, at lade excel's (eller i mit tilfælde OpenOffice Calc's) "problemløser" minimere afstanden fra kurven til punkterne i det regneark jeg vedhæfter her. Men mine punkter er jo lavet ud fra absorbans, og ikke ud fra koncentration, og det er derfor jeg er bekymret for, om mine Km og Vmax værdier bliver forkerte.

EDIT: De værdier der er i regnearket er ikke mine, men nogle eksempler som var indtastet derfra hvor jeg hentede arket

Og du får ikke oplyst din absorptionskoefficient? I så fald, lavede du en absorption med et stof, hvis koncentration, du kendte?

Hvilket stof er dit substrat?

 ONPG (Ortho-nitrophenyl-(Beta)-D-galactopyranosid) er mit substrat. Men jeg målte absorptionen på det ene af de to produkter, ONP (Ortho-nitrophenolat), som er gult. Jeg lavede ni forskellige koncentrationer af mit substrat, men eftersom det er produktet jeg målte på, kender jeg ikke andet end startkoncentrationen, som jo er 0 :)

Ved hvilken bølgelængde undersøgte du? Har nemlig arbejdet med o-nitrophenolat før

 461,3 nm. Jeg havde forskellige forsøgsvejledninger, en sagde 420, en anden 460, men jeg lavede en scanning og vurderede at det var ligegyldigt hvilken jeg valgte.

Ok. Det jeg har fra mine gamle forsøg er, at ONP har ε = 4500 M^-1 cm^-1 ved 420 nm og omkring neutral pH. Så må du jo selv vælge, om du vil anvende den, eller om du vil forsøge at finde en mere præcis absorptionskoefficient (de hedder på engelsk Extinction Coefficient, hvis det hjælper). Men i så fald kan du regne din koncentration

c = A / ε*l

Og da man typisk anvender en længde af kuvetter på ~ 1 cm (regner jeg med du også har) får du

c = A / 4500 M^-1

Jeg vil skyde på, du får små tal, så det kan måske være mere passende at finde c i mM:

c = A / 4.5 mM^-1

 Ok, mange tak for hjælpen :)

Held og lykke med det :)