Biologi
gensplejsning cDNA metoden
Hej alle sammen
Jeg sidder med det her problem, at jeg ikke rigtig kan forstå cDNA metoden under gensplejsning. Er der nogle af jer der vil hjælpe mig med en lille redegørelse/forklaring på det?
På forhånd tak. :)
Svar #1
28. januar 2013 af exutu (Slettet)
Der findes jo mange forskellige metoder som involverer cDNA, men lad os gå ud fra at dit mål er at lave et cDNA bibliotek:
- Du laver et celleekstrakt af de ønskede celler og oprenser RNA.
- Da alle mRNA'er indeholder en poly-A-hale (næsten), bruger du en oligo-dT-primer som kan hybridisere med poly-A-Halen.
- Vha. din oligo-dT-primer og Reverse-transkriptase laver du første DNA streng
- Vha en DNA polymerase laver du den anden streng. Forskellige typer systemer bruger forskellige typer primere, men man kan fx putte en oligo-dG sekvens på ender af den nylavede DNA-streng og så bruge en oligo-dC primer.
- Herefter kan der ligeres Linkere på (eller evt kan restriktionssites laves, ved snedige primer designs).
- Kløvning med restriktionsenzym og indsætning i vektor (fx plasmid).
- Herefter kan det klones ind i en vært.
Det var en kort beskrivelse af nogle af de vigtigste trin, men hvis du spørger mere specifikt, kan jeg også svare mere specifikt.
Skriv et svar til: gensplejsning cDNA metoden
Du skal være logget ind, for at skrive et svar til dette spørgsmål. Klik her for at logge ind.
Har du ikke en bruger på Studieportalen.dk?
Klik her for at oprette en bruger.