antal transformanter ug i plasmid DNA

Noget af et forsøg at udføre, taget i betragtning af dit nuværende uddannelsesstadie som 1.års HF'er. Well, friskt nok må jeg sige.

Først skal du finde hvor meget plasmid du har på agarpladen. Dette gøres ved at se hvor meget du har fortyndet plasmidets koncentration. Fx hvis du er startet med 1ug plasmid og har opløst det i 50ul cellekultur samt 450ul medium vil du have en koncentration på 1ug/(50ul+450ul) = 0,002ug/ul. Nu finder du så hvor meget plasmid du har taget på agarpladen ved at gange med antal ul af opløsningen du har taget på pladen. Fx hvis du har overført 50ul til pladen har du nu 0,002ug/ul * 50ul = 0,1ug plasmid på pladen. Idet du har antallet af dine kolonier (lad os sige 10) kan du nu finde antal kolonier (transformanter) pr. ug plasmid ved 10kolonier / 0,1ug plasmid = 100kolonier pr ug plasmid.

Kort fortalt kan du udregne det ved: (antal kolonier / vægt af pUC i ug) * (volumen af alt du har opløst plasmidet i såsom medium og cellekultur / volumen du har kommet på agarpladen)

Resultaterne plejer at ligge mellem 10⁸kolonier pr ug plasmid til 10⁴ pr ug plasmid

tak for svaret Mads.. det var et stort hjælp ;) nu kan jeg regne ud tror jeg, selvom vi ikke har lavet fortydning . vi overført 100 ul kompetencecelle sammen med 10 ul pUC18 til en epp.rør og tilsat 1 ml LBmedium efter inkubation og varme chock . der udpladet på 100 ul til LB+Amp plade og 50 ul til anden LB+Amp plade. vi har talt antal kolonier, så vidste vi ikke hvordan man ka regne trasformanterne. nu må jeg lige prøve så. TAK ;)